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      技術交流

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      通過PCR原理了解PCR儀的關鍵

      [內容提要]:根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。那么如何通過PCR原理來了解PCR儀的關鍵呢,請詳細閱讀本文!

      通過PCR原理了解PCR儀的關鍵 

      PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR梯度PCR位PCR實時熒光定量PCR儀四類。那么如何通過PCR原理來了解PCR儀的關鍵呢,請詳細閱讀下文!

      美國賽默飛世爾Piko系列PCR儀

      DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶的作用下,以單鏈為模版,根據堿基互補配對原則復制成新的單鏈,與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計與模板DNA5’端結合的兩條引物,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制,多次重復變性解鏈退火合成延伸的循環就可以以幾何級數大量擴增特定的基因。

      發現耐熱DNA聚合酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該類酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。

      PCR原理可以看出,PCR儀的關鍵是升降溫的步驟。

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